уровни автолиза были выше для ADBAC, чем для DDAC.

rx online

Большее количество поглощающего 260 Нм материала протекало при 35°C, чем при 25°C, что свидетельствует о температурно-зависимом автолитическом процессе и свидетельствует о ферментативной реакции (42). Хьюго и Блумфилд (22) ранее сообщили, что эксперименты при 4°C ингибировали активность аутолитического фермента, причем регистрировалась только утечка метаболического пула. Как для ADBAC, так и для DDAC концентрация, по-видимому, диктует, будет ли инициирован аутолиз в клетках. Аутолиз наблюдался при концентрациях 9 мкг / мл и выше, и это совпадало с внутриклеточным истощением калия из клеток более чем на 30% (26). Контроль HEPES и концентрация 4,5 мкг / мл не инициировали аутолиз в экспериментальном масштабе времени, с соответствующим низким уровнем утечки калия. Сайкс (46) и Ламиканра и Аллвуд (28) ранее сообщали о важности калия для поддержания стабильности рибосом и внутренней ионной среды.

При 35°C уровни автолиза были выше для ADBAC, чем для DDAC. Однако для ADBAC автолиз достиг максимума при 12 мкг / мл, а затем, по-видимому, уменьшился с более высокими концентрациями биоцида, что наводит на мысль о биоциде, замедляющем действие ферментов РНКазы или, возможно, препятствующем дальнейшему высвобождению материала. Для DDAC уровень автолиза оказался постоянным, но ниже, чем в изученном диапазоне концентраций. Солтон (42) ранее наблюдал концентрационную зависимость между цетилтриметиламмонийбромидом (CTAB) и высвобождением 260 Нм в нескольких точках контакта. Хотя Salton (42) исследовал концентрации более высокие (до 900 ppm), чем те, которые использовались в этом исследовании, было отмечено, что снижение высвобождения 260 Нм произошло выше 270 ppm. Это наблюдение появилось в области максимального поглощения CTAB клетками. Salton (42) заметил, что поглощающий материал 260 Нм на клетках, насыщенных CTAB, частично объясняет падение детекции 260 Нм. Такасаки и др. (48) ранее сообщалось, что внутриклеточные макромолекулы, такие как фосфолипиды, белки и нуклеиновые кислоты, просачиваются из клеток S. aureus и могут осаждаться катионными поверхностно-активными веществами. В этом исследовании изотерма поглощения ADBAC показала, что несвязанный ADBAC в концентрациях 12 мкг/мл и выше присутствовал бы в реакционном сосуде и, возможно, взаимодействовал со свободным поглощающим материалом 260 Нм, который просачивался из клеток. DDAC обладал Изотермой поглощения H (высокой), и только очень низкие уровни остаточного биоцида могли свободно взаимодействовать с поглощающим материалом 260 Нм; следовательно, не наблюдалось никаких эффектов концентрации. Хьюго и Лонгворт (24) ранее обнаружили, что вторичная утечка из клеток была уменьшена из-за ингибирования аутолитических ферментов хлоргексидином. Считалось также, что клеточная поверхность или цитоплазматическая мембрана застывают, предотвращая утечку.

Наблюдение за выжившими клетками в течение 24 ч после удаления ADBAC и DDAC показало, что аутолиз вносит ограниченный вклад в бактерицидную активность. При воздействии на клетки 9 мкг/мл ADBAC или DDAC в течение 4 ч часть клеток погибала бы из-за бактерицидной активности. Другие клетки получили бы сублетальную дозу, хотя этого было бы достаточно, чтобы вызвать аутолиз. Некоторые клетки избежали бы бактерицидной или аутолитической индуцирующей активности и, следовательно, смогли бы выжить при условии использования подходящей среды восстановления. После удаления биоцида клетки, которые подверглись аутолизу или были слишком сильно повреждены для восстановления, не смогли бы размножаться и были бы обречены на смерть в течение 24-часового периода обнаружения, и эти клетки, не затронутые Биоцидом, выжили бы. Выжившие клетки, возможно, отвечали за стабилизированное количество выживших, наблюдаемое примерно через 18-24 ч.

Клетки, предварительно экспонированные до 9 мкг / мл ADBAC или DDAC, указывали на ускоренное высвобождение 260-Нм поглощающего материала над метаболическим пулом, по сравнению с клетками, поддерживаемыми в буфере HEPES. Это позволило предположить, что АДБАК и ДДАК индуцируют аутолиз, хотя после удаления биоцида скорость утечки, по-видимому, снижается. В течение 24 ч, независимо от предварительной обработки клеток, наблюдался аутолиз, который, по-видимому, был необратимым событием, как это наблюдалось ранее Хьюго и Блумфилдом (22).

Мы пришли к выводу, что как ADBAC, так и DDAC являются мембраноактивными агентами, которые взаимодействуют с цитоплазматической мембраной в S. aureus, индуцируя немедленную утечку внутриклеточных компонентов, подтверждая первичное поражение для обоих. Над рядом концентраций изученных для утечек, MIC, и бактерицидных исследований, DDAC было незначительно более мощно чем ADBAC, но никакие выдающие разницы в их свойствах не наблюдались.

АДБАК и ДДАК были инициаторами аутолиза при низких концентрациях биоцидов (от 9 до 18 мкг / мл), что вместе с бактерицидной активностью способствовало гибели клеток. DDAC был менее чувствителен к изменениям температуры от 25°C до 35°C, чем ADBAC, и это нашло отражение в значениях Q10.

Используемые протоколы и данные наблюдений, представленные в настоящем исследовании, вместе с рассчитанными численными дескрипторами биоцидного действия (значения Q10 и показатели концентрации) позволят составителям рецептур и микробиологам, использующим антисептики и дезинфицирующие средства, сделать разумный выбор четвертичного аммониевого соединения для достижения широкого спектра активности и сдерживания угрозы резистентных вспышек, особенно в условиях стационара. Это приведет к улучшению антисептического и дезинфицирующего дизайна, а также к рассмотрению окончательной обработки абиотических и биотических поверхностей. Эти численные параметры эффективности также могут быть использованы для лучшего понимания эффективности четвертичного аммониевого соединения при заданном наборе условий и рекомендации по соответствующему применению, будь то для использования в качестве консервантов в фармацевтических продуктах или для общего использования в очистке клинических или бытовых и пищевых сред.

Добавить комментарий

Закрыть меню
×

Корзина

Обратный звонок