Тест дезинфицирующих средств На Антибактериальную Активность

rx online

TSA (Триптический соевый агар, Merck, Германия), TSB-ST
(Триптоновый соевый бульон, Biomerieux, Франция), разбавитель
(MRTD, Biomerieux, Франция), полисорбат 80 (CAS:
9005-65-6, Сигма Алдрич, Германия), лецитин (КАС:
8002-43-5 Альфа Aesar), бычий сывороточный альбумин (CAS:
9048-46-8, Sigma Aldrich), тиосульфат натрия (CAS:
7772-98-7, Merck) были использованы. N-бензил-Н-dodecylN,Н-dimethylammonium хлорид (бак-С12) и Nbenzyl-Н-tetradecyl-Н,Н-dimethylammonium
хлорид (BAC-C14) поставлялся компанией Sigma-Aldrich
(Штайнхайм, Германия). Вода (ранг ЛК-МС / МС),
ацетонитрил (ранг ЛК-МС/МС) и укусная кислота (≥
%99,7) были получены из Sigma-Aldrich (Steinheim,
Германия.) Все образцы растворов фильтровали через
Фильтры PTFE 0.22 μm (Millex-HV, Германия) перед
инъекция.


2.2 Химический Анализ
Контрольно-измерительные приборы и хроматографические условия:
Система LC серии Acquity вод (воды, США)
оснащен бинарным менеджером растворителей
(D07UPB225M), менеджер образца (E07UPS996M) и
тандемный квадрупольный детектор (QBA157) был использован для
вводят 5 мкл аликвоты обработанных образцов на а
Систем ВЭЖХ УСЗ Т3 (1,8 мкм, 2.150 мм) (вод,
США), который выдерживался при (40 ± 2 ° С) в колонной печи.
Количественное определение было достигнуто путем обнаружения МС-МС в
положительный режим Иона для обоих гомолог, оборудованный с а
электроспрей ионизации (ESI) положительной полярности. Источник
температура и температура опустошения были установлены на
120 C и 350 C соответственно. Обычное явление
параметры а именно., газ конуса и газ столкновения были установлены на
100 л/ч и 20 л / ч соответственно. Соединение
параметры а именно., энергия конуса и энергия столкновения
были 15 В и 65 В. детектор был связан с данными
система (Waters, MassLynx) для сбора данных и
расчет.


Подвижная фаза А состояла из 0,1 % уксусной кислоты в
ацетонитрил, подвижная фаза B составляла 0,1 % уксусной кислоты в
вода. Использовалась градиентная программа, начинающаяся с
расход 0,4 мл / мин и 80% подвижной фазы а
(20 % Б) на времени впрыски на 1 минута, и постепенно
изменение до 20 % A (80% B) в течение 0,5 мин и до 15 %
А (85 % б) до 3 мин после инъекции. Затем, мобильный
фазовый состав был смещен на 80 % A (20% B)
более 0,5 мин. Этот подвижный фазовый состав сохранялся
на 0,5 мин. Условия поддерживались в течение 4 мин
для уравновешивания колонки. Объем впрыска 5 мкл
были использованы и температура колонки была отрегулирована
при 40 °С.


Протонированные ионы-предшественники [M + H]+ BAC-C12
и BAC-C14 были обнаружены в полной массе развертки
спектры при m/z 304 и 332 соответственно. Столкновение
энергия была оптимизирована, и следующая дочь
были выбраны ионы, m / z 304 → 91, m / z 304 → 212 m/z
332 → 91 и m / z 332 → 240 для определения
Бац-бац и С12-С14, как показано в Таблице 1.
Стандартное решение
Первичные исходные растворы стандарта были подготовлены
взвешивание отдельно. Первичный маточный раствор (1.00
мг / мл) BAC-C12 и BAC-C14 были получены в
ацетонитрил. Соответствующие разведения были сделаны в
ацетонитрил для получения рабочих растворов 10 нг/мл,
25 нг/мл, 50 нг/мл, 100 нг/мл и 250 нг / мл перед
анализ и эти стандарты были использованы для подготовки
калибровочная кривая.
мерная колба с ацетонитрилом (в комплекте 0,1 %
уксусная кислота.) Затем раствор перемешивали в течение нескольких минут.
минут.


Образец решение 2: 100 мкл раствора образца 1 был
измеряют и разводят до 10 мл в мерной колбе
с ацетонитрилом (входит 0,1 % уксусной кислоты). Затем,
раствор перемешивали в течение нескольких минут.
Чувствительность
Чувствительность оценивали путем определения предела
обнаружение (LOD) и предел количественного определения (LOQ) для
определяемое соединение. Пределы обнаружения для каждого из вас
гомологи рассчитывались соответственно соотношению S/N. ЛОД
была определена как самая низкая концентрация аналита
что может быть обнаружено, наличие квантификатора ионов
каждый из них имеет отношение сигнал / шум не менее 3. Лок был
низкие концентрации, которые соответствовали критериям и Лод
отношение сигнал-шум 10.
Линейность
Линейность для BAC исследовали, сделав три
повторите инъекции каждого из пяти стандартных
концентрации, охватывающие диапазон 10,0-250,0 нг/мл.
Внешний стандартный метод был использован для того чтобы установить
калибровочная кривая и количественное определение BAC в образцах.
Повторяемость
Повторяемость метода оценивалась путем внесения
пять последовательных инъекций 100,0 нг/мл бак
стандарты


2.3 Тест На Антибактериальную Активность
Тест-Организмы
Тест на антибактериальную активность оценивали с помощью
после четырех тестовых организмов. Синегнойная палочка
ATCC 15442 и Staphylococcus auerus ATCC 6538
были получены из Biomerieux (Франция) в виде Биоболла
который содержит точное количество клеток в воде
растворимые мяч, обеспечивая беспрецедентную точность
количественный микробиологический контроль качества. BioBall
штаммы являются аккредитованным эталонным материалом под
условия эксперимента
Процедуры тестирования и валидации проводились по адресу
в то же время. Все исследования проводились в двух экземплярах
и привиты с использованием техники распространения пластины.
Согласно стандарту, обязательная температура теста
было 20 °C, время контакта составляло 1 минуту для бактерий.
Интерферирующее вещество испытывали 0,3 г / л крупного рогатого скота
альбумин для чистых условий. Полисорбат 80 30 г/л,
использовали тиосульфат натрия 10 г/ л, лецитин 3 г/л
в качестве нейтрализатора для определения антибактериальной активности
метод разбавления-нейтрализации.
вещество, 1 мл тестовой суспензии (N) на водяной бане при
0 °C, 2 минуты затем 8 мл 20 % BAC на основе
в качестве продукта добавляли дезинфицирующее средство. После общения
было затрачено время, 1 мл пробы исследуемой смеси (НС)
и переносят в пробирку, содержащую 8 мл нейтрализатора
и 1 мл воды. Процедура была выполнена в
водяная баня при температуре 20 °C, 5 минут. 1 мкл образца
разделяют на чашки Петри и добавляют 20 мл растопленного
TSA для бактерий и они были инкубированы 36 ± 1 °C, 24
ч. Антибактериальные экспериментальных контрольных условиях (а),
Контроль нейтрализатора (B) и проверка метода (C)
были проведены работы по определению валидации
выбранные экспериментальные условия, проверка
отсутствие какого-либо токсического действия в условиях испытаний.Дезинфекция и гигиена являются двумя из самых старых
стратегии профилактики заболеваний. Дезинфицирующие средства также
известные как биоциды используются для защиты человека
благосостояния, которые являются составом, содержащим один или
более активное вещество которое контролирует вредное
организмы. [15]. Защита и предотвращение являются
основные назначения биоцидов. Поэтому очень
важно разрабатывать и производить новые противомикробные препараты для борьбы с ними
бактерии и дрожжи. В настоящее время широкий ассортимент
биоцидные соединения, проявляющие различные уровни
антимикробная эффективность [3, 16]. Из-за этого
важно для определения антибактериальной восприимчивости
профиль и химический анализ активного вещества
этот продукт.
Основная цель этого исследования заключалась в проверке
содержание активного вещества хроматографическим методом
метод. Поэтому было подтверждено активное
вещество дезинфицирующего средства на основе 20% BAC в качестве
решение для тестирования продукта. Наше исследование также было проверено
разделение гомологов бак как бак C12 и
К14 путем использование ионов бензалкония ЛК-МС/МС сделал
вверх по длинной углеродной цепи. Эти алкильная цепь
12 и 14 атомов углерода, которые составляют по меньшей мере 70 %
на баке [2, 17]. Другой целью данного исследования было:
разработайте химический метод определения
валидационные исследования BAC и его гомологов в
биоциды. Эти выводы показали, что это
замечательная предварительная работа для биоцидного продукта
развитие. Аналогично метод ВЭЖХ был
проведенный и утверженный для химического анализа
биоциды исследователями [18-20]. Однако наш метод LCMS / MS представленный для извлечения и
анализ бак оказался с высокой степенью воспроизводимости,
абсолютный и более эффективный. Таким образом, это подтвердилось
что был разработан инновационный биоцидный продукт
и утверженный перед микробиологическим испытанием.
Биологическая активность исследуемого продукта составила
приписанный к своей группе четвертичного аммония
Ионы BAC, обладающие антибактериальными свойствами [21, 22].
В результате этого было также показано, что
экспозиция микроорганизмов до 20 % BAC
концентрация представляла собой бактерицидную эффективность.
Количественный метод суспензии и валидация
исследования показали, что бактерицидная эффективность для
оценка тестируемого продукта в медицинской области.
Потому что контроль микроорганизма во время чистки
и санитарная обработка имеет важное значение для медицинской
окружающая среда, пищевая промышленность и бытовые зоны
[23,19]. Экспериментальные условия (такие как
время экспозиции, гигиенические условия и штаммы) были
выбирается исходя из практических условий
тестируемый продукт. Тестирование продукта показало сильное
антибактериальная активность в отношении E. coli K12, P. aeruginosa,
S. auerus и E. hirae. Антибактериальная эффективность
новый продукт был подчеркнут что важность
биоцидов особенно в медицинской области. Результат
указала, что она получила высокую оценку осуществления
для использования теста продукта располагается в
ответственность производителя.
В заключение, он был разработан, чтобы выявить
соответствующие исследования и применимые методы для
превращение активного вещества в продукт, который может
будьте Биоцидом. Основной целью настоящего исследования было
для характеристики и количественной оценки уровня теста
продукт, который состоял из 20 % бак
концентрация ВЭЖХ-МС/МС метода. Кроме того, тест
продукт как обработка дезинфицирующего средства показал сильное
влияние на бактерии при кратковременном воздействии и
грязные условия были использованы. Проверка и
проверочные исследования были также усовершенствованными процедурами
это существенно поддержало результаты. Эти
общие выводы продемонстрировали замечательную
соотношение между химическим и биологическим
аналитические выводы. Это первое исследование, чтобы подчеркнуть
важность количественной оценки и тестов эффективности
перед процессами производства и маркетинга
биоцидные продукты.

Добавить комментарий